던파 다운로드 속도

photoleaching (frap) 분석 후 형광 회복은 AGS-GR 세포 (0.2 x 106 셀/24mm 페 트리 접시) 2 µ g NR4A2-egfp 및 6 µ l metafectene 프로와의 변이 transfection 후에 24 h를 수행 했다. Gastrin (10nm)가 첨가 되 고, 20 분간 배양 기에 남아 있는 세포 들이 Zeiss lsm 510 메타 라이브를 이용 하 여 63x/1.4 오일 DIC를 사용 하였다. 설정 10 사전 블리치 이미지 50-mW로 아르곤 레이저 100%의 레이저 전력에서 작동 하는 488nm 라인과 표백에 의해 다음을 생성 하도록 구성 했다. 0.7 µm의 광 스 플 라이스를 가진 단 하나 z 단면도의 형광 심상은 사용 되었다. 관심 영역 (투자 수익) 표백에 사용 되는 2.5 µm 반경 동그라미 했다. 우리는 200 반복의 속도를 사용 하 고 표 백제 시간은 7.2 초 했다. 이후 이미징 사전 블리치 속도 80 초까지 계속 도달 했다. 형광 복구 시그마 플롯 (표 S2)를 사용 하 여 계산 했다. confocal 영상은 노르웨이 과학 기술 대학, 세포 및 분자 이미징 코어 시설에서 수행 되었습니다. t-darpp의 최저는 트 라 스툴-내성 세포에 사 멸을 유도 합니다.

터미널 deoxyncleotdyl 전이 효소-중재 dutp 닉 엔드 라벨 mrna가 검출 됐다 trastuzumab에-내성 HR의-6 세포를 뒤섞여 함께 이루어졌다 sirna 또는 t-darpp sirna 올리고 뉴클레오티드는 24 h를 위한 20의 μ g/m l trastuzumab 또는 차량 (PBS)를 가진 thetreatment 따르기. 세포가 4 `, 6-diidiidino-2-페예린드 (파란색 형광) 및 터미널 deoxynuletidyl 전근-중재 dutp 닉 엔드 라벨링-양성 apoptotic 세포와 counter스테인드 했다 tritc 필터 (적색 형광)로 시각 했다. 200 셀 20 임의 필드에서 × 40 (> 400cells)을 계산 했다. 사 멸의 비율은 총 4 `, 6-diidiidino-2-페예린드-긍정적인 세포에 상대적으로 결정 되었다. 그림과 같이, 결과는 trastuzumab에 HR-6 세포의 저항을 표시 하 고 > t-darpp (P ≤ 0.001)의 최저를 따르는 자 멸 자에 있는 8 겹 증가. A: gastrin의 시간적 프로 파일은 췌 선 선 암 세포 (AR42J)에 NR4A2 mrna 표정을 유도 했다. 위원회는 3 개의 독립적인 마이크로 어레이 시계열 실험 (가입 번호 E-matab-1268 및 GSE32869)에서 데이터를 표시 합니다. 그리고 데이터 포인트는 정규화 된 log2 변환 된 신호 강도로 제공 됩니다.

실험 1: 치료 (녹색 선) 및 지탱 한 gastrin (파란 선) 세포를 위한 mrna 표정 수준. 실험 2: (gastrin의 지속적인 존재의 14 h) 및 일시적인 형태에서 (gastrin는 처리의 1 h 후에 제거 되었다) 지탱 한 형태에서 대우 된 세포에 있는 mrna 수준. 실험 3: 지속적인 gastrin 치료는 존재 (오렌지 라인)과 부재 (파란색 라인)의 cycloheximide (chx) 1과 10 h. 녹색과 회색 라인 사이에 6 개의 다른 시간 지점에서 측정 되었습니다 치료 및 chx 치료 제어 세포를 mrna 수준을 보여, 각각. 모든 데이터 포인트는 두 생물 복제의 뜻입니다. Gastrin (10 nM) 치료 및 치료 제어 세포는 여러 시간 지점에서 병렬 및 수확 (2-3 기술 복제의 수영장)에서 성장 했다, 패널에 표시 된. 일시적인 대 지속적인 gastrin 처리를 가진 실험에서는, 치료 되지 않는 gastrin 대우 한 세포의 성장 매체는 gastrin 처리 후에 1 h 제거 되었다; 세포는 그 때 gastrin (지탱 한 gastrin 대우 된 세포)를 가진 신선한 혈 청 자유로운 매체가 또는 gastrin 없이 (전이적으로 gastrin 대우 되거나 치료 되지 않는 세포) 첨가 되기 전에 혈 청 자유로운 매체로 세척 되었다.

Posted on 23/06/2018 in Sin categoría

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